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HPLC使用细则

 

HPLC使用细则

 

1.      开机前,检查流动相,如长时间不用需要重新过滤抽气,注意选择合适的滤膜;有机相使用聚偏氟乙烯膜,水相用混合纤维素酯膜。水中如有明显的絮状物,应重新更换。A:水、B:甲醇、D:水或乙腈。

2.      先开电脑,再开液相,选择合适的检测器与所需使用的柱子,然后打开软件。连接柱子时,流速开到0.1~0.2ml/min。

3.      如仪器长时间未用,应先将管道的气泡排出:直接打开废液阀,开流速2.0.~3.0ml/min,排气2~3min,在关闭阀之前流速降至≤1.0min(如使用RID检测器,流动相必须在超声波中脱气10~20min)。

4.      样品处理:用乙腈或甲醇溶解,震荡,离心(n≈10000转/min,t=3~5min,样品复杂时间可更长或用滤膜过滤)。

5.      进样前,应用乙腈或甲醇冲洗进样器2~3次,并确保进样无气泡;RID检测器必须冲洗参比池10-15min至平衡,不能梯度洗脱。

6.      如使用缓冲盐作为流动相,实验结束后,必须先用100%水长时间冲柱子(时间可较长,1ml/min----2-3h;0.2ml/min----8h或更长),再用甲醇冲洗保存。

7.      进样器用甲醇冲洗2~3次。进样针用甲醇或丙酮洗至流畅。

8.      关机,先关软件,再关液相,后关电脑。

9.      记录实验操作,条件,样品名称,以及实验中碰到的问题,解决问题的方法,确保下次使用正常。